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第二节 羊肚菌菌种生产、营养袋制作与出菇试验
一、菌种生产
羊肚菌菌种最大的缺点就是容易退化、变异,给羊肚菌栽培带来很大困难。为了解决这些问题,每年羊肚菌菌种都需要分离、提纯和做出菇试验,并且需要妥善保管、运输,控制菌种传代。菌种生产流程如下:羊肚菌选择和采集→组织(孢子)分离→提纯培养→出菇试验→优良一级菌种→复壮培养、菌种扩繁→二级菌种→接种、培养栽培菌种。
1.菌种分离
羊肚菌的分离方法与其他食用菌大体相同,采用组织分离和孢子分离。
(1)组织分离 选取成熟、具优良长势的羊肚菌子实体,在无菌环境中用接种针将组织块接入平皿培养基上,获得菌种。
① 培养基制作。配方为马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18~20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、水1000ml。将培养基装到500ml三角瓶中(每瓶装入200ml),115℃灭菌30min后在无菌条件下将培养基倒入平皿中(每个平皿约20ml),冷却备用。
② 选取头潮、新鲜、健壮、周围幼菇或
原基多、朵形圆整、七八分熟的子实体(图1-10)。
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图1-10 选子实体
③ 菇面用75%酒精棉球擦拭消毒。
④ 切取组织块(菌肉)。用手术刀切开种菇(图1-11),在菌盖或菌柄内侧用无菌手术刀或尖嘴镊子取5mm见方组织块(菌肉)接于培养基上(图1-12)。
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图1-11 切种菇
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图1-12 组织块接于培养基上
⑤ 培养。温箱18℃恒温培养,2天后组织块萌发(图1-13),待菌落长到2cm(图1-14),用接种针选取最优菌落的先端菌丝接入新培养基,进行尖端脱毒。将菌丝生长快、产菌核适中、产色素少且晚的分离物挑选出来,作为第一代母种保存备用。
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图1-13 组织块萌发
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图1-14 菌落长到2cm
除菌丝尖端脱毒法外还可采用断桥脱毒法。在无菌条件下,用接种针把平皿培养基中间培养基断开1cm,把菌种接在断开培养基一侧(图1-15、图1-16),菌丝穿越断开处,伸入前端的培养基上,可以纯化菌种。
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图1-15 接在断开培养基一侧
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图1-16 接在断开培养基一侧示意图
(2)孢子分离 在无菌条件下,使孢子在适宜的培养基上萌发成菌丝体而获得纯培养的方法。多孢分离的菌株不能直接用于生产,要经过出菇试验。采集孢子有多种方法,如整朵插种菇、三角瓶钩悬和试管琼脂培养基黏附法等,此处介绍整朵插种菇法。
① 选取头潮、新鲜、健壮、八九分成熟的子实体。
② 采集孢子。将按照组织分离方法消毒子实体的整朵菇插入无菌孢子收集器里,在18℃下培养2~3天后子囊孢子落下,形成孢子印(图1-17) 。
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图1-17 采集孢子
③ 孢子分离、培养。无菌条件下,将少量孢子移入盛无菌水的三角瓶内稀释成孢子悬浮液,其浓度以1滴水中含5~10个孢子为宜。用接种环取孢子悬浮液在斜面上划线,孢子萌发后菌丝体长在一起。取菌丝块转接新的平皿培养基上,18℃避光培养(图1-18)。选取菌丝生长快,菌核数量适中,产生色素少且晚的培养物用于栽培试验。
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图1-18 菌丝培养
2.母种扩大繁殖及保藏
(1)母种扩大繁殖 选取无污染菌丝优良的试管菌种,用接种针划取带培养基的小块菌种接到斜面培养基中(图1-19),一般1支母种第一次扩接15~20支。将转接的菌种放在18℃培养箱中避光培养7天,待菌丝长满试管斜面后备用。母种转代尽量不要超过3代。
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图1-19 母种扩大
(2)优质母种质量标准 菌丝长势均匀,开始是白色,后来慢慢变成黄色,无杂菌污染,表明菌丝生长良好(图1-20、图1-21)。
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图1-20 六妹母种(罗金洲 提供)
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图1-21 梯棱母种(罗金洲 提供)
(3)母种的保藏 放入冰箱3~5℃保鲜层保存,但时间最长不超过3个月。
3.原种和栽培种制作
(1)常用配方
① 木屑30%,稻壳30%,小麦20%,腐殖土20%。
② 木屑65%,小麦20%,白糖1%,石膏1%,过磷酸钙1%,腐殖土12%。
③ 玉米芯40%,木屑30%,小麦15%,石膏1%,过磷酸钙1%,腐殖土13%。
④ 木屑40%,棉籽壳30%,小麦15%,石膏1%,过磷酸钙1%,腐殖土13%。
以上每个配方最后都需要加入原料用量1%的石灰。
(2)制作方法 小麦浸泡或煮涨,木屑发酵3个月以上,再加入煮涨的小麦、湿土及其他材料,将配方混合均匀后,加入清水,使含水量达55%~65%时即可装料。原种一般采用500~750ml的玻璃瓶,装瓶要求上下松紧一致,用薄膜封口就行。栽培种一般用(15~18)cm×33cm的聚丙烯折角袋装料,无棉盖封口。高压灭菌在1.5MPa下维持4h,常压灭菌在100℃以上保持10~12h,注意灭菌时间不能过长,压力不能过高,否则会破坏其中的养分。高压灭菌见图1-22。
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图1-22 高压灭菌
(3)培养 在无菌条件下,每支母种可
接原种3~5瓶,每瓶原种可接40~60袋栽培种,接种后放在18~22℃条件下暗光培养。3天菌丝开始萌发吃料,10天菌丝可布满培养基表面,15~20天可长满。在培养期间要尽量避免强光刺激,菌龄不超过30天为好。
合格的羊肚菌菌种应该菌丝生长均匀、迅速,无污染;在瓶肩部或料与瓶的缝隙处产生菌核,菌核初期白色,后期为金黄色至浅褐色的颗粒状(图1-23~图1-26)。菌丝太弱、菌丝老化、含杂菌者不能用。
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图1-23 六妹原种(罗金洲 提供)
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图1-24 梯棱原种(罗金洲 提供)
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图1-25 六妹栽培种(罗金洲 提供)
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图1-26 梯棱栽培种(罗金洲 提供)
二、营养袋制作
(1)营养袋规格 营养袋有2种规格,一般用12cm×24cm或14cm×28cm的折角袋装料。
(2)营养袋配方 营养袋的配方很多,以下配方供参考。
① 稻壳40%,小麦60%。另加占总料1%的石灰。
② 玉米芯30%,稻壳20%,小麦50%。另加占总料1%的石灰。
③ 木屑30%,玉米芯20%,小麦40%,麸皮9%,过磷酸钙1%。另加占总料1%的石灰。
(3)制作方法 原材料的预处理方法和做菌种时一样,将配方混合均匀后,使含水量达55%~65%时即可装料。将装好料的营养袋用专用扎口机或者塑料绳扎口,然后装入编织袋或筐内,放入灭菌柜内灭菌。高压灭菌在1.5MPa下维持6h,常压灭菌在100℃以上保持18~20h,灭完菌冷却后使用(图1-27、图1-28)。
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图1-27 营养袋
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图1-28 营养袋准备入棚
三、出菇试验
羊肚菌是子囊菌,多次扩大繁育的菌种较易发生变异,不经出菇试验,直接用于大量生产,就有可能导致子实体生产率降低,甚至绝收。下面简单介绍一下室内出菇试验。
① 播种(图1-29、图1-30)。
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图1-29 播种
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图1-30 遮阳网
② 菌丝生长、形成菌霜(图1-31、图1-32)。
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图1-31 菌丝爬土
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图1-32 长满土面
③ 放营养包。放12cm×24cm菌袋制作的营养包,营养包倒放土上,压实使袋内营养料紧贴菌丝(图1-33)。
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图1-33 发菌整体情况
④ 出菇(图1-34~图1-36)。
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图1-34 盆栽菇蕾
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图1-35 盆栽成菇
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图1-36 品种大田栽培试验
(罗金洲 编写)